細胞自噬(autophagy or autophagocytosis) ：又稱為Ⅱ型細胞死亡 ，是細胞在自噬相關基因(autophagy related gene ，Atg) 的調控下利用溶酶體降解自身受損的細胞器和大分子物質的過程 。自噬作為時下的研究熱點 ，有非常深遠的研究意義 。k8凯发国际生物在自噬研究方面具有豐富的經驗 ，k8凯发国际可以為您提供從課題設計-實驗操作-實驗結果-數據分析的整體解決方案 。

自噬誘導劑
1）Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin  ：模擬內質網應激；
2）Carbamazepine/ L-690 ，330/ Lithium Chloride（氯化鋰） ：IMPase 抑制劑（即Inositol monophosphatase ，肌醇單磷酸酶）；
3）Earle's 平衡鹽溶液 ：製造飢餓；
4）N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide） ：Class I PI3K Pathway 抑制劑；
5）Rapamycin ：mTOR 抑制劑（這是最常用的）；
6）Xestospongin B/C ：IP3R 阻滯劑 。

自噬抑制劑

1）3-Methyladenine（3-MA） ：（Class III PI3K） hVps34 抑制劑；
2）Bafilomycin A1 ：質子泵抑制劑；
3）Hydroxychloroquine（羥氯喹） 。

細胞自噬形態學特徵的檢測方法

1）透射電鏡觀察自噬體 。

    自噬體是自噬的標誌性結構 。自噬體屬於亞細胞結構 ，直徑一般為300～900nm ，平均500nm ，普通光鏡下看不到 。通過透射電子顯微鏡發現自噬體一直是觀察自噬現象最直接 、最經典的方法 ，是自噬檢測的「金標準」 。

2）熒光顯微鏡下採用GFP-LC3融合蛋白來示蹤自噬形成 。

    由於自噬體膜形成過程中需要LC3 ，因此通過標記LC3可以識別自噬體 。

3）熒光染色法

    用熒光染料對組織切片或細胞進行染色觀察自噬的發生 。晚期自噬體與溶酶體融合而呈酸性 ，根據這個特點可用酸向性染料MDC 、吖啶橙和Lyso Tracker標記自噬溶酶體 。

自噬標誌性蛋白
1）自噬標記蛋白LC3

    微管相關蛋白1輕鏈3(LC3／Atg8)是自噬體膜上的標記蛋白 。細胞內存在兩種形式的LC3蛋白 ，LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ 。細胞內新合成的LC3其C端被Atg4蛋白酶剪切 ，成為胞質可溶形式的LC3-Ⅰ 。當自噬體形成後 ，LC3-Ⅰ經剪切和泛素化加工修飾 。與自噬體膜表面的磷脂酰乙醇胺(PE)偶聯 ，成為膜結合形式的LC3-Ⅱ並定位於自噬體內膜和外膜,因此LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的大小可以估計自噬水平的高低 。

2）細胞自噬底物蛋白的檢測

         p62偶聯於LC3 ，作為一種調節因子參與自噬體的構成 ，在自噬的中 、晚期被降解 。細胞內整體p62水平的表達與自噬活性存在負相關 。蛋白質免疫印跡技術檢測p62水平的降低可以反映自噬活性程度 。p62的增加暗示着自噬 、溶酶體降解途徑被抑制 。

3）Atg12-Atg5複合體 

    除了LC3 ，自噬體膜上標誌性蛋白質還有Atg12-Atg5結合體 。Atg12和Atg5在翻譯後就像單個分子一樣共價結合在一起 ，它定位在自噬體雙層隔離膜的整個延長階段 。

4）Beclin1 

    哺乳動物Beclin1是酵母Atg6基因的同源物 。Beclin1通過激活自噬對細胞生長和抑瘤機制進行控制 。蛋白質印跡技術檢測Beclin1蛋白表達情況直接反映自噬活性 。

5）自噬相關的標誌性蛋白還包括ATG1 、ATG9 、DRAM1 、ATG14 、ATG16以及 ATG18等 。

自噬的調控通路

1）依賴mTOR（哺乳動物雷帕黴素靶點）途徑的自噬

A．PI3K-AKT-mTOR信號通路

         B. AMPK-TSC 1/2-mTOR 信號通路

2）其它的信號通路

A. 3-甲基腺嘌呤（3-MA）通過抑制Class ⅢPI3K的活性抑制自噬；

 B. beclin1和UVRAG作為正調控子 ，抗凋亡因子bcl-2作為負調控子共同參與組成ClassⅢPI3 複合物調控自噬；

C. GTP結合的G蛋白亞基Gαi3抑制自噬；GDP結合的Gαi3蛋白活化自噬；

D. 死亡相關蛋白激酶（death-associated proteinlinase,DAPK）和DAPK相關蛋白激酶（DAPK-related protein kinase-1,DRP-1）誘導自噬 。